|
|
|
|
产品目录号
|
GKC-LMP010215
|
产品名称
|
Human STK24-A549 KO Cell Pool
|
基因编号
|
STK24
|
Uniprot_id
|
Q9Y6E0
|
宿主细胞
|
A549
|
组织来源
|
人非小细胞肺癌细胞
|
规格
|
1×106cells/T25培养瓶或1×106cells/冻存管
|
培养基
|
MEM+10%FBS+1%P/S
|
筛选标记
|
N/A
|
生长特性
|
贴壁细胞,上皮细胞样
|
培养条件
|
37℃,5% CO2的培养箱
|
传代比例
|
1/2到1/3传代,2-3天长满
|
筛选标记
|
N/A
|
换液频率
|
2-3天换液
|
支原体检测结果
|
阴性
|
蛋白组验证结果
|
N/A
|
抗体验证结果
|
N/A
|
目标基因介绍
|
Serine/threonine-protein kinase that acts on both serine and threonine residues and promotes apoptosis in response to stress stimuli and caspase activation. Mediates oxidative-stress-induced cell death by modulating phosphorylation of JNK1-JNK2 (MAPK8 and MAPK9), p38 (MAPK11, MAPK12, MAPK13 and MAPK14) during oxidative stress. Plays a role in a staurosporine-induced caspase-independent apoptotic pathway by regulating the nuclear translocation of AIFM1 and ENDOG and the DNase activity associated with ENDOG. Phosphorylates STK38L on 'Thr-442' and stimulates its kinase activity. In association with STK26 negatively regulates Golgi reorientation in polarized cell migration upon RHO activation (PubMed:27807006).
Regulates also cellular migration with alteration of PTPN12 activity and PXN phosphorylation: phosphorylates PTPN12 and inhibits its activity and may regulate PXN phosphorylation through PTPN12. May act as a key regulator of axon regeneration in the optic nerve and radial nerve.
|
细胞系生成
|
采用CRISPR方法生成Human STK24-A549 KO Cell Pool
|
数据说明
|
Sanger 测序结果显示Human STK24-A549 KO Cell Pool敲除效率为100%
|
应用
|
体内和体外测定
|
复苏
|
1)在37℃水浴中预热完全培养基。
2)将冻存管在 37℃水浴中解冻1-2分钟。
3)将冻存管转移到生物安全柜中,并用70%乙醇擦拭表面。
4)拧开冻存管管盖,将细胞悬液轻轻转移到含有9mL完全培养基的无菌离心管中。
5)在室温下以125g离心5-7分钟,弃上清。
6)用5mL的完整培养基重悬细胞沉淀,将细胞悬液转移到T25培养瓶中。
7)将细胞转移到37℃,5% CO2的培养箱中培养。
8)参考传代比例:1/2到1/3传代,2-5天长满。
|
传代
|
1)待培养瓶中细胞汇合度至80%-90%以上,可进行细胞传代。
2)将培养基、PBS、胰酶(0.25%Trypsin_EDTA Gibco 25200-056)等从4℃冰箱中拿出,置于37℃水浴中温度接近37℃时取出并在瓶子表面喷洒75%酒精后置于生物安全柜中。
3)从培养箱中取出待传代的培养瓶,瓶身喷洒75%酒精后置于生物安全柜中。
4)为避免冲散细胞,沿培养瓶上壁PBS润洗细胞,清洗细胞后弃去,T25加2mL。
5)加入对应体积的胰酶(T75加1.5mL,T25加0.5mL),并轻轻晃动瓶身使胰酶平铺满细胞底部。可根据实际情况适当增加或减少用量。约1-2min后大部分细胞脱落时,加入对应体积的完全培养基终止消化,并用5mL移液管轻轻吹打至细胞全部脱落。
6)将细胞悬液转移至15mL离心管,悬液300g离心5min,弃上清。
7)移取5mL完全培养基重悬细胞,按需求调整接种比例,并补充培养瓶中完全培养基,T75加至13-15mL,T25加至5mL,加1%双抗。
8)盖上瓶盖拧紧后轻轻晃动瓶身,使细胞混合均匀后置于37℃,5% CO4培养箱中。
|
细胞冻存
|
1)准备冻存液,并提前预冷。
2)确保待冻存的细胞满足冻存要求,用显微镜检查以下状态:健康的外观及形态特征、所处生长周期(对数晚期)、无污染或衰退迹象。
3)对细胞进行消化及离心处理(具体步骤参考传代培养流程)
4)按照每管1mL的量添加冻存液重悬细胞,吹打均匀后分装至冻存管。
5)将细胞放在程序降温盒中,在-80℃冰箱中冷冻。
6)后续将细胞转移到液氮罐中,以便长期储存。
|
返回
|